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Procedimiento para la preparación del medio de montaje: glicerina-gelatina

     Al iniciar la preparación de polen para una Colección de referencia, será necesario contar con un medio de montaje apropiado a tal fin.

Materiales necesarios: 50 g de Gelatina sin sabor (grado alimenticio), 170 ml agua destilada, 150 ml glicerina, 7 g cristales de fenol.

Protocolo:

- Disolver la gelatina a baño de María en el agua destilada agitando con varilla de vidrio.

- Agregar la glicerina y los cristales de fenol.

- Colocar en frascos de boca ancha y dejarlos destapados hasta que se enfríe, luego tapar y mantener a 4 oC. También se pueden usar goteros de vidrio que luego pueden ponerse a baño María para su uso.

 

Recomendaciones y/o precauciones:

› La mezcla se solidificará al enfriarse y las burbujas de aire subirán a la superficie. Si quedaron muchas burbujas, conviene desechar la porción superior.

› Pueden agregarse algunas gotas de colorante (fucsina) para mejorar el contraste de la exina al observar al microscopio, especialmente cuando se trata de exinas muy delgadas o granos de polen muy pequeños.

› Para evitar contaminación se puede fraccionar en envases más pequeños. El uso de gotero simplifica controlar la cantidad a usar del medio de montaje

› Los tratamientos químicos, los medios de montaje y el tiempo de almacenamiento de los preparados, afectan sensiblemente la forma y el tamaño de los granos de polen. Para una mayor información al respecto se puede consultar Reitsma (1969).

 

Procedimiento para polen con contenido celular. Técnica de Wodehouse (1935)

Se utiliza para material fresco (ver Obs. 1) o material seco (de herbario). Mediante esta técnica los granos de polen conservan el contenido citoplasmático.

Materiales: alcohol absoluto, glicerina-gelatina, fucsina, portas y cubre-objetos. Parafina, etiquetas, agujas y mechero.

Equipo óptico: lupa binocular y microscopio óptico.

Protocolo:

- Separar las anteras y colocarlas sobre un porta-objetos.

- Utilizando una aguja de sección separar, bajo lupa, los granos de polen, eliminando los trozos de tejidos más grandes.

- Agregar una gota de alcohol absoluto y dejar evaporar.

- Agregar una gota de colorante (fucsina en solución alcohólica) y un pequeño trozo de gelatina-glicerina (o utilizar gotas de glicerina-gelatina ya líquida que se puede manejar con el gotero).

- Colocar a la llama del mechero, sin acercarlo demasiado, y retirarlo. Repetir la operación hasta que la glicerina-gelatina se funda (no debe dejarse mucho tiempo a la llama para no estropear el material). También se puede usar placa o plancha caliente.

- Homogeneizar la preparación con aguja de disección, cuidando que no se formen burbujas, pues entorpecerían la observación del preparado.

- Colocar el cubre-objetos y presionar con una aguja histológica o pinza desde el centro hacia los bordes para facilitar que las burbujas de aire se desplacen. Sellar con parafina líquida, colocar gotas de parafina líquida en los ángulos en los cuales quedará el cubre-objeto y luego colocar éste presionando con una pinza o aguja histológica o de disección.

- Colocar la etiqueta identificadora (ver Obs. 2).

 

Observaciones:

Observación 1: Herborizar las plantas según las técnicas convencionales (Rodríguez y Rojas, 2006) y depositar los ejemplares identificados y fehacientemente determinados en un herbario que los preserve. Este herbario será la referencia de la colección palinológica y es necesaria su preservación.

Observación 2: Dado que toda esta información no entra en una etiqueta, usualmente se coloca el nombre de la especie y un número de registro que sería el de la Palinoteca, que debe estar en un Libro o acta de registro manuscrito y/o digital con toda la información del espécimen.

 

Recomendaciones y/o precauciones:

› Las ventajas de la técnica: se pone en práctica con rapidez y es de bajo costo, además su aplicación no requiere el uso de campana de extracción de gases.

› Desventajas de la técnica: no permite un análisis detallado de la esporodermis y los preparados pueden ser vulnerables al ataque de los hongos por lo que sería necesario reponerlos periódicamente.

› Si se desea colorear la exina se puede agregar fucsina o verde de metilo a saturación en la preparación del medio de montaje.

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